Die Assay-Zeit wird durch die neu veröffentlichte RTF-EXPAR-Methode, die den Reverse-Transkriptase-freien (RTF)-Ansatz zur Konvertierung verwendet, erheblich von etwa einer Stunde auf einige Minuten verkürzt RNA in DNA gefolgt von EXPAR (Exponential Amplification Reaction) zur Amplifikation bei einer einzigen Temperatur.
Kontrolle der Rate von COVID-19 Die Ausbreitung erfordert eine genaue und schnellere Virenteststrategie. RT-PCR (Reverse Transkriptase-Polymerase-Kettenreaktion) ist die derzeit genaueste Testmethode ein zweistufiger Test, der etwa 60 Minuten pro Probe dauert.
Die Forscher der University of Birmingham haben über eine neuartige Methode zum Nachweis von SARS-CoV-2 berichtet. Dies könnte ein viel schnelleres Testen ermöglichen und ist ausreichend empfindlich.
Der virale RNA-Nachweis von RT-PCR (Reverse Transkriptase-Polymerase-Kettenreaktion) beinhaltet die Umwandlung von viraler RNA in komplementäre DNA (cDNA), gefolgt von der Amplifikation der cDNA durch eine quantitative PCR (qPCR). Die cDNA wird dann mit einem Fluoreszenzfarbstoff nachgewiesen. Dies dauert bis zu einer Stunde.
Die Assay-Zeit wird durch die neu veröffentlichte RTF-EXPAR-Methode, die den Reverse-Transkriptase-freien (RTF)-Ansatz zur Umwandlung von RNA in verwendet, erheblich von etwa einer Stunde auf einige Minuten verkürzt DNA gefolgt von EXPAR (Exponential Amplification Reaction) zur Amplifikation bei einer einzigen Temperatur. Die bei einer einzigen Temperatur stattfindende Amplifikation ist der Schlüssel zur Geschwindigkeit, da dadurch langwierige Heiz- und Kühlschritte der RT-PCR vermieden werden. Darüber hinaus ist der zu amplifizierende DNA-Abschnitt im Vergleich zur RT-PCR kleiner. Daher erzeugt EXPAR in wenigen Minuten bis zu 108 DNA-Produktstränge. Die Duplexbildung wird wie bei der RT-PCR-Methode unter Verwendung des Fluoreszenzfarbstoffs SYBR Green überwacht.
Interessanterweise kann die neue Methode modifiziert werden, um mehrere andere Infektionskrankheiten nachzuweisen, die durch RNA-Viren verursacht werden, zum Beispiel Ebola, RSV usw.
Quelle (n):
Carter et al. (2020). Sub-5-Minuten-Nachweis von SARS-CoV-2-RNA mit einer Reverse Transcriptase-Free Exponential Amplification Reaction, RTF-EXPAR. Vordruck. Veröffentlicht bei medRxiv Gepostet am 04. Januar 2021. DOI: https://doi.org/10.1101/2020.12.31.20248236
***
